Стерилизация насыщенным паром под давлением — автоклавирование. Что представляет собой стерилизация паром под давлением (автоклавирование)? Стерилизация паром под давлением проводится

При температуре 132 градуса - давление 2 кгс/ кв.см в течение 20 мин.

При температуре 120 градуса – давление 1,1 кгс/ кв.см в течение 45 мин.

Стерилизуют перевязочный материал и операционное белье в паровых стерилизаторах в биксах или в мешках из плотной материи (с завязками типа кисета) Герметичность биксов, которые используются для стерилизации перевязочного материала и операционного белья обеспечивается зажимающим устройством, благодаря которому ободок плотно прижимается к стенке бикса. Исправность этого устройства необходимо проверять каждый раз перед закладкой в бикс материала, если герметичность нарушена, то содержимое бикса инфицируется. Перед закладкой бикса проводится 2-х кратная гигиеническая обработка бикса с внешней и внутренней стороны бикса. Используемый для упаковки материал, простыни или салфетки, используемые для накрытия стерильного стола, один раз в неделю подвергаются стирке. При стерилизации материала в мешках упаковывают материал в два мешка, надетых один поверх другого. Все материалы укладываются вертикально таким образом, чтобы можно было сразу найти нужное, не вынимая из бикса ничего лишнего. Все материалы укладываются рыхло, чтобы пар свободно проникал в глубину между бельем и внутрь рулонов. Каждый бикс должен иметь маркировку с указанием сведений о содержимом, дате стерилизации, а также отделения, которому принадлежит бикс. В каждый бикс помещается индикатор для контроля стерильности, так как должна быть полная уверенность в том, что произошло полное уничтожение микробов (обеспложивание).

Паровую стерилизацию контролируют разными методами. Можно, например, регистрировать высокую температуру и продолжительность стерилизации при этой температуре. Используют также термочувствительные химические индикаторы, которые наносят на внешнюю сторону каждой упаковки. Они не свидетельствуют о стерильности предметов внутри упаковки, а показывают, подвергалась ли упаковка стерилизации. При стерилизации больших упаковок индикатор помещают и внутрь нее. Внешний индикатор показывает, проник ли пар в упаковку.

Бактериологический контроль качества паровой стерилизации проводят не реже 1 раза в месяц, проводится санитарной службой. Используются стандартные бактериологические индикаторы, содержащие дозированное количество спор микробов, которые особо устойчивы к действию горячего пара, и их гибель говорит о полной стерильности предметов. Если автоклав исправен и режим стерилизации соблюден, споры обычно гибнут. Однократное прорастание спор не обязательно свидетельствует о не стерильности обработанных предметов. В этом случае необходимо проверить режим стерилизации (температуру и длительность), правильность загрузки автоклава и его эксплуатации, а затем повторить пробу.

Стерилизация паром. Стерилизация паром.

Насыщенный водяной пар под давлением обладает высокими биоцидными св-вами, не повреждает большинство стерилизуемых материалов, не нуждается в освобождении от стерилизующего агента. Для С.п. характерны надежность, доступность, безопасность для персонала, экономичность, высокая степень автоматизации. Стерилизующий эффект пара связан с прогреванием объекта в процессе конденсации пара в воду на поверхности и внутри предмета. Эффект конденсации оптимален у насыщенного пара, когда в нем находится только 3% жидкой фазы. Перегретый пар, содержащий менее 2% жидкой фазы, может сжечь объект; влажный пар (более 3% жидкой фазы) сильно увлажняет предметы. Для получения стерилизующего эффекта также необходимо, чтобы из рабочей камеры был полностью удален воздух, иначе он может помешать контакту пара с поверхностью предмета и оставить его нестерильным. Выпускают 2 типа паровых стерилизаторов. Первый - стерилизаторы перемещения тяжестью; в них поток пара проникает в верхнюю часть камеры и вытесняет из нее воздух через дренажную трубку. Давление и температура пара возрастают и достигают установленной величины. Включается таймер, к-рый поддерживает постоянную температуру до окончания экспозиции. После этого пар выводится через дренаж из камеры; рубашка камеры остается горячей и ее сухой жар высушивает стерилизуемые объекты. Крышка (дверь) открывается при снижении температуры камеры до 90 °С. В ином случае контейнеры с жидкостью могут взорваться. Второй тип носит название предвакуумный паровой стерилизатор. В нем вакуумная система в 2 цикла вытягивает большинство воздуха из камеры и стерилизуемых объектов через дренаж, после чего камеру и ее рубашку наполняют паром под давлением. Давление и постоянная температура поддерживаются автоматически. После окончания срока стерилизации камера освобождается от пара и объекты высушиваются с помощью вакуумной системы, в камеру впускают фильтрованный воздух. Стерилизатор выгружается. В зависимости от стерилизуемых объектов температуру пара в паровых стерилизаторах устанавливают от 110 до 138°С, давление пара от 0,4 до 2,5 атм, экспозиция - от 15 до 60 мин. Паром стерилизуют почти все изделия из металла, стекла, термостойкой пластмассы, резины, белье, перевязочный и шовный материал, питательные среды, в том числе жидкие, лекарственные препараты. С.п. - предпочтительный способ стерилизации. Исключение составляют термолабильные материалы, крупногабаритные предметы, сложные многокомпонентные приборы типа эндоскопов.

(Источник: «Словарь терминов микробиологии»)

Смотреть что такое "Стерилизация паром." в других словарях:

автоклавирование/стерилизация паром - См. также Autoclave (автоклав). [Англо русский глоссарий основных терминов по вакцинологии и иммунизации. Всемирная организация здравоохранения, 2009 г.] Тематики вакцинология, иммунизация EN steam autoclaving … Справочник технического переводчика

стерилизация - и, ж. stérilisation f. 1. Уничтожение микроорганизмов кипячением, прогреванием, воздействием химических веществ и т. п.; обеззараживание. Стерилизация молока. Лучевая стерилизация. Стерилизация паром. БАС 1. Стерилизация хирургических… … Исторический словарь галлицизмов русского языка

СТЕРИЛИЗАЦИЯ - СТЕРИЛИЗАЦИЯ. Стерилизация в хирургии. Для обеззараживания хир. инструментов употребляются металлические стерилизаторы ки Ряе. 1. Рисунок 2. пятильники. Наиболее простыми, удобными для применения в походных условиях (экстренная операция, в… … Большая медицинская энциклопедия

I Стерилизация (лат. sterilis бесплодный) полноте уничтожение всех видов микроорганизмов и их спор на поверхности и внутри различных предметов, а также в жидкостях и воздухе. Применяется в медицине, микробиологии, гнотобиологии, пищевой… … Медицинская энциклопедия

И; ж. [от лат. sterilis бесплодный] 1. Уничтожение микроорганизмов различных веществ и предметов действием высоких температур, химических веществ, фильтрацией в пищевых продуктах, на хирургических инструментах, перевязочном материале. С.… … Энциклопедический словарь

СТЕРИЛИЗАЦИЯ - (от лат. sterilis — бесплодный), обеспложивание, уничтожение различных микроорганизмов и их спор в разных объектах с помощью физических и химических факторов. С. важна для клинической ветеринарии при всех хирургических манипуляциях,… … Ветеринарный энциклопедический словарь - мероприятие для борьбы с вредителями и почвоутомлением. С. п. ч. осуществляется путем обработки почвы различными антисептиками (хлороформом, толуолом, хлорпикрином и др. соединениями, уничтожающими вредителей и фитопатогенные микроорганизмы) и… … Толковый словарь по почвоведению

стерилизация - и; ж. (от лат. sterilis бесплодный) см. тж. стерилизационный 1) Уничтожение микроорганизмов различных веществ и предметов действием высоких температур, химических веществ, фильтрацией в пищевых продуктах, на хирургических инструментах,… … Словарь многих выражений

Автоклавирование проводит специально подготовленный специалист, так как работа по обслуживанию аппарата, работающего под давлением, требует подготовки и строгого соблюдения правил техники безопасности.

Б. Для стерилизации термолабильных материалов (напр., сложных питательных сред) используют дробную стерилизацию текучим паром при неплотно закрытой дверце автоклава. Она предполагает 3–4–кратное повторение следующего цикла: материал обрабатывают 30–60 минут текучим паром в автоклаве при температуре 100 0 C или выдерживают на водяной бане при 80 0 C, затем на сутки помещают в термостат при 37 0 C. Во время нахождения в термостате не успевшие погибнуть споры бактерий прорастают в вегетативные формы, которые погибают при следующем цикле обработки.

Тиндализацию - более мягкий вариант дробной стерилизации, используют для стерилизации еще более термолабильных объектов. При этом стерилизуемый объект 5–6 дней подряд выдерживают при температуре 56–60 0 C, в промежутках ставят в термостат для прорастания спор.

Тиндализация/дробная стерилизация неэффективна в отношении прионов.

Недостаток парового способа стерилизации связан с тем, что пар превращается в конденсат, вызывающий коррозию металла инструментов, а также увлажняет материалы с появлением риска их реинфицирования.

Воздушный способ. Стерилизация сухим горячим воздухом проводится металлических в сухожаровых шкафах («сухожарах») (рис.68). Режимы стерилизации включают температуру и время (табл. 25).

Рис. 68. Сухожоровой стерилизатор

Таблица 25

Режимы стерилизации сухим жаром

Сухой горячий воздух не увлажняет изделия, а значит, не вызывает коррозии металла инструментов.

Недостатки воздушного способа стерилизации связаны с физическими свойствами сухого горячего воздуха:

вызывает высыхание бактериальных клеток, в результате скорость их гибели замедляется;

эффективность стерилизации уменьшается, если из-за неправильной загрузки инструментов образуются воздушные прослойки, в которых температура оказывается ниже (теплопроводность воздуха меньше, чем пара). Поэтому сухожаровые шкафы оборудуются внутренними вентиляторами для принудительной циркуляции воздуха;

при длительной экспозиции может вызвать обугливание стерилизуемых материалов, поэтому стерилизацию сухим жаром используют для изделий из термостабильных материалов (стекла, металла), а также для гидрофобных веществ (масел).

5. Гласперленовый способ (стеклянные бусины) предназначен для быстрой стерилизации цельнометаллических инструментов, не имеющих полостей, каналов и замковых частей (рис. 69).

Гласперленовый способ используется в стоматологии для экспресс-стерилизации мелких инструментов (боров, пульпоэкстракторов, корневых игл), а также рабочих частей более крупных инструментов (зондов, гладилок, шпателей). Так же можно стерилизовать акупунктурные иглы. Гласперленовый стерилизатор может находиться в рабочем состоянии в течение дня. Стерилизуемые инструменты не затупляются и не ржавеют.

Гласперленовый метод используется для стерилизацции стоматологического инструментарияв европейских странах и Израиле с 1997 года. Однако он не одобряется в США, так как при гласперленовой стерилизации инструмент стерилизуется не полностью, а только его рабочая зона. Его можно использовать только вместе с химической стерилизацией.

Недостатки гласперленового способа:

гласперленовая стерилизация не является полноценным методом стерилизации. Целиком можно простерилизовать лишь мелкие, полностью размещающиеся в среде нагретых стеклянных шариков, цельнометаллические инструменты. При стерилизации крупных инструментов в стерилизующей среде можно разместить только рабочую часть. Производителями зарубежных гласперленовых стерилизаторов часто указывается неоправданно короткое время выдержки: 5–15 сек. В то же время экспериментальные данные свидетельствуют о том, что даже при времени выдержки 180 сек не обеспечивается стерилизация щипцов, ножниц и других инструментов, имеющих массивные замковые части;

Инструменты можно простерилизовать только в неупакованном виде. Инструменты, простерилизованные в гласперленовом стерилизаторе, не подлежат хранению;

Химические средства контроля работы гласперленовых стерилизаторов отсутствуют.

6. Ультрафиолетовое излучение с длиной волны 260 нм используется для стерилизации воздуха помещений (в операционных, боксах), и жидкостей (молока, соков, воды). Источником УФО являются бактерицидные и кварцевые лампы. Воздействие УФ лучей должно быть непосредственным, так как они обладают слабой проникающей способностью и не проходят через обычное стекло, белую бумагу. Длительная работа ламп снижает интенсивность излучения, поэтому облучение целесообразно вести с перерывами. Срок облучения 30–60 мин. УФ лучи могут вызвать отек слизистой глаз, поэтому не следует находиться в помещении с включенными лампами.

7. Радиационный способ . Стерилизующим агентом при радиационной стерилизации является – и β–излучение. Наиболее широко используется –излучение, обладающее высокой проникающей способностью (обычно изотоп кобальта–60, реже изотоп цезия–137). β–излучающие изотопы используются крайне редко, так как β–излучение обладает гораздо меньшей проникающей способностью.

Эффективность радиационной стерилизации зависит от общей дозы излучения и не зависит от времени. Средняя летальная доза для микроорганизмов всегда одинакова, проводится ли облучение при низкой интенсивности в течение длительного промежутка времени или недолго при высокой интенсивности излучения. Доза 25 кГр (2,5 Мрад) надежно гарантирует уничтожение высокорезистентных споровых форм микроорганизмов. Температура стерилизуемых изделий в ходе стерилизации не повышается.

Радиационный метод используется для высокоэффективной промышленной стерилизации изделий, не выдерживающих высоких температур: одноразовых изделий из полимерных материалов (шприцев, капельниц, катетеров), режущих инструментов, шовного и перевязочного материала, некоторых лекарственных препаратов. Могут быть простерилизованы большие партии материалов в упакованном виде. Процесс стерилизации автоматизирован.

В ЛПУ радиационная стерилизация не применяется в связи с большой дороговизной установок и по соображениям техники безопасности.

8.Инфракрасное излучение создает в рабочей камере малогабаритного стерилизатора температуру 200±30 0 С. Полный цикл стерилизации инструментов в неупакованном виде занимает в инфракрасном стерилизаторе от 10 до 25 мин (в зависимости от инструментов), включая этапы выхода на режим и охлаждение.

Недостатки инфракрасной стерилизации:

отсутствие возможности стерилизовать инструменты упакованными;

Ограниченная приемлемость из-за повреждающего действия на полимерные материалы (пластмассу, резину и т.д.);

Химические средства контроля работы инфракрасных стерилизаторов отсутствуют.

9.Воздействие высокочастотным ультразвуком приводит к образованию пены из мельчайших пузырьков газа, находящихся в растворенном состоянии в ЦП клетки. Это приводит к разрыву КС и гибели микроорганизмов. Ультразвуком стерилизуют соки.

Химические способы стерилизации

Химические вещества используются для низкотемпературной стерилизации крупногабаритных предметов, а также термочувствительных материалов и оборудования, которые приходит в негодность при других методах стерилизации.

1. Газовый способ применяется для стерилизации крупногабаритных изделий, а также термолабильной медицинской аппаратуры и изделий из резины и пластмассы (эндоскопы и принадлежности к ним, диализаторы, катетеры).Используются химические соединения, обладающие безусловным спороцидным действием: окись этилена, бромистый метил, смесь окиси этилена и бромистого метила. При газовой стерилизации необходимо строго контролировать температуру, влажность, концентрацию стерилизующего газа, давление и экспозицию. Это возможно только при наличии оборудования с автоматическим прохождением цикла.

Окись этилена используется для стерилизации объектов, чувствительных к температуре выше 60 0 C. Окись этилена требует больше времени для стерилизации, чем при тепловой обработке. Обычно стерилизация окисью этилена проводится три часа при 30–60 0 C и относительной влажности выше 30 %, концентрация газа при этом составляет 200–800 мг/л. Окись этилена легко воспламеняется.

Недостаток газовой стерилизации состоит в том, что газы могут вступать в химическую реакцию с материалами изделий, образуя токсичные и канцерогенные соединения. Поэтому после газовой стерилизации необходима дегазация - удаление со стерильных изделий остатков примененного средства в специальных аэраторах в течение 2 часов.

2.Жидкостная стерилизация растворами химических соединений (стерилянтами) применяется для стерилизации термолабильных медицинских инструментов, шовного материала, перчаток, оптических приборов, для хранения игл, инструментов.

при комнатной температуре: кислородсодержащие (6-90 % перекись водорода) и хлорсодержащие («Дезоксон–1»), 96 % этиловый спирт;

при повышенной (до 40–50 0 С) температуре: альдегиды (2% глутаральдегид, формальдегид, 0,55 % ортофталевый альдегид).

Стерилизация растворами химических соединений проводится в стерильных емкостях из стекла, металлов, термостойких пластмасс при полном погружении изделий в раствор при их свободной раскладке. Во избежание разбавления рабочих растворов, используемых для стерилизации, погружаемые в них изделия должны быть сухими.

35 –90 % перекись водорода используется для стерилизации тепло- и температурочувствительных предметов, таких как жесткие эндоскопы. Самое большое преимущество перекиси водорода в качестве стерилянта - короткое время цикла: использование высоких концентраций перекиси водорода позволяет сократить время цикла стерилизации в современных установках до 28 минут. Перекись водорода может быть смешана с муравьиной кислоты в устройствах для стерилизации эндоскопов.

Однако не все объекты могут быть простерилизованы перекисью водорода и ее, проникающая способность ниже, чем у окиси этилена.

Альдегиды. Стерилизация формальдегидом проводится при температуре 60–80 0 С в течении 60 минут. Многие вакцины стерилизуют формальдегидом. Формальдегид нельзя использовать для стерилизации оптических инструментов, эндоскопической аппаратуры, имплантатов.

0,2 % уксусная кислота используется для стерилизации инструментов.

0,01 % мертиолят натрия применяют для консервирования сывороток и жидких вакцин.

А нтибиотики добавляют в питательные среды при проведении вирусологических и иммунологических исследований.

Ионы серебра оказывают токсическое действие на некоторые бактерии, вирусы, водоросли и грибы благодаря олигодинамическому действию серебра. Однако тестирование и стандартизация этого метода стрилизации затруднительна.

Прионы обладают высокой резистентностью к химической стерилизации. Хлор и гидрокид натрия являются самыми эффективными в отношении прионов.

Недостатки стерилизации растворами химических соединений:

к стерилизации необходимо готовиться так же, как к работе в операционной (стерильные халат, перчатки, бахилы, маска). Помещение должно быть оборудовано по типу бактериологического бокса;

по окончании процесса необходима нейтрализация стерилизующего раствора стерильной дистиллированной водой;

химические средства часто имеют короткий срок годности, вызывают коррозию инструментов; необходимо использовать вещества, химически совместимые с обрабатываемыми объектами;

невозможность стерилизовать упакованные изделия;

трудность контроля эффективности обработки;

использование химических стерилянтов создает новые проблемы для безопасности труда: многие химические стериляны летучи и токсичны при контакте с кожей и слизистыми оболочками.

Поэтому растворы химических средств целесообразно использовать для стерилизации только в тех случаях, если применение других разрешенных методов стерилизации не представляется возможным.

Представляет интерес технология проведения стерилизации с использованием электрохимически активированных растворов (анолитов), вырабатываемых в специальных установках.

Преимущества электрохимически активированных растворов заключаются в том, что при наличии электроэнергии эти средства можно получать непосредственно в ЛПУ из питьевой воды и поваренной соли. «Нейтральный анолит» рекомендуется для стерилизации эндоскопов при комнатной температуре в течение 45 минут.

Недостатком этих средств является повреждающее действие на изделия из коррозионнонестойких металлов.

3. Плазменная стерилизация. Плазма - продукты распада пероксида водорода, образующиеся под воздействием электромагнитного излучения.

Плазменная стерилизация проводится при температуре 46-50 0 С в течение 54–72 минут. Плазменные стерилизаторы могут быть использованы как при централизованной, так и при децентрализованной системе организации стерилизации. Самый малый плазменный стерилизатор занимает площадь 1 м 2 , объем его рабочей камеры 50 л.

Пероксид водорода распадается на нетоксичные продукты - воду и кислород, не оказывая вредного воздействия на человека и окружающую среду.

Недостатки плазменной стерилизации:

не подлежат стерилизации плазмой изделия из целлюлозы, полиамида, каучука, порошки, жидкости, хирургическое белье, перевязочный материал;

малодоступный метод для широкого применения в ЛПУ из-за высокой стоимости оборудования. Использование плазменного метода наиболее приемлемо для стерилизации уникальных термолабильных изделий, имеющихся в единичном экземпляре и используемых неоднократно в течение рабочего дня. Для повседневной рутинной стерилизации стоит выбрать более доступный и дешевый метод;

отсутствуют общепризнанные международные стандарты для данного метода.

4. Озоновая стерилизация. Озон является сильным окислителем. В течение многих лет озон используется на промышленных объектах для стерилизации питьевой воды и воздуха, а также для дезинфекции поверхностей. Недавно он был предложен для стерилизации в медицине. Стерилизация производится в специальных аппаратах озоно-воздушной смесью, продуцируемой генератором озона из атмосферного воздуха.

Недостатки озоновой стерилизации:

окислительная способность озона ограничивает его спектр применения. При контакте с озоном могут повреждаться изделия из стали, меди, резины;

озон токсичен, а имеющиеся сегодня аппараты не позволяют обезопасить персонал от контакта с ним;

озон нестабилен;

разработка режимов стерилизации применительно к конкретным изделиям оказалась проблематичной из-за ограничений в возможностях созданных образцов аппаратов.

Механическая стерилизация

Механическая стерилизация (фильтрование) предполагает пропускание стерилизуемого материала через фильтры, механическое задерживание клеток микроорганизмов и адсорбцию их в порах фильтра.

Фильтры с размером пор 0,2 мкм эффективно задерживают бактерии. Вирусы также могут быть задержаны, если фильтр имеет размер пор 20 нм. Прионы не могут быть удалены при фильтрации. Фильтры готовят из мелкопористых материалов (каолин, асбест, фарфор, нитроцеллюлеза). Их помещают в специальный фильтродержатель, а затем под давлением пропускают стерилизуемый раствор. При высокой степени обсемененности последовательно используют фильтры с разной величиной пор (от больших к меньшим) и при фильтрации постепенно «отсеивают» микроорганизмы различных размеров. Фильтрование применяется для получения небольшого количества стерильных растворов.

Фильтрованием можно стерилизовать термолабильные жидкости (лекарственные препараты; питательные среды, содержащие белки и витамины) и воздух (при проведении иммунологических и вирусологических исследований). Для достижения лучших результатов стерилизация жилдкостей фильтрованием проводится в ламинарных боксах, в которых воздух также фильтруется.

Лабораторную посуду перед стерилизацией необходимо тщательно вымыть, высушить, завернуть в бумагу. Чашки заворачивают в бумагу по одной или не­сколько штук. В верхние концы пипеток вставляют ватные тампоны, предупреж­дающие засасывание материала Градуированные пипетки заворачивают в длин­ные полоски бумаги шириной 5 см. На бумаге отмечают объем завернутой пипет­ки. В пеналах пипетки стерилизуют без дополнительного завертывания в бумагу.

Острые концы пастеровских пипеток запаивают в пламени горелки и завора­чивают в бумагу по 3-5 штук.

Флаконы, колбы, пробирки закрывают ватно-марлевыми пробками. Пробка должна входить в горлышко сосуда на 2/3 длины, не слишком туго, но и не свобод­но. Поверх пробок на сосуд надевают бумажный колпачок. Пробирки связывают по 5-50 штук и обертывают поверх бумагой.

Режим работы сухожарового шкафа

Стерилизацию сухим жаром осуществляют в сухожаровых шкафах (печь Пастера). Сухим жаром стерилизуют лабораторную посуду. Ее неплотно загружают в печь, чтобы был равномерный прогрев материала. Дверь шкафа плотно закрывают, включают электронагревательный прибор и доводят температуру до 160-165 0 С и стерилизуют 1 час. По окончании стерилизации выключают обогрев, но дверцу шкафа не от­крывают, пока печь не остынет (иначе холодный воздух вызовет образование трещин на посуде). Режим стерилизации: 160°С - 60 мин, 180°С - 15 мин, 200° С - 5 мин. Жидкости, питательные среды, предметы из резины и синтетических мате­риалов нельзя стерилизовать сухим жаром.

Стерилизации паром под давлением подвергают перевязочный материал, операционное белье, хирургические инструменты, питательные среды, лаборатор­ную посуду, инфицированный материал, инъекционные растворы. Материал помещают в емкости (биксы). На дно бикса помещают прокладки из ткани, впиты­вающие влагу после стерилизации. Стерильность материала сохраняется 3 суток. Инфицированный материал в чашках и пробирках стерилизуют в металлических бачках с крышкой.

Стерилизацию паром под давлением производят в автоклаве. При однократ­ной обработке погибают как вегетативные, так и споровые формы бактерий. Паром под давлением стерилизуют питательные среды, кроме сред, содержащих нативные белки, жидкости, приборы, имеющие резиновые части. Простые среды (МПА, МПБ) стерилизуют 20 мин при 120°С (1 атм). Среды, содержащие нативные белки и углеводы, при этой температуре нельзя стерилизовать, т. к. это легко изменяющиеся от нагревания вещества. Среды с углеводами стерилизуют дробно при 100 0 С или в автоклаве при 112 0 С (5 атм.) 10-15 мин. Различные жидкости, приборы, имеющие резиновые шланги, пробки, бактериальные свечи и фильтры стерилизуют при 120 0 С (1 атм.) в течение 20 мин.

Инфицированный материал (в пробирках, чашках) помещают в специальные металлические ведра или баки с отверстиями для проникновения пара и стерилизуют при 126 0 С (1,5 атм.) в течение 1 часа. Также стерилизуют инструменты после работы со споровыми бактериями.

Существует 2 режима стерилизации:

Текучим паром в автоклаве или в аппарате Коха при не завинченной крышке и открытом выпускном клапане, когда антибактериальное действие пара проявляется в отношении вегетативных форм. Так стерилизуют среды с витаминами и углеводами, мочевиной, молоком, картофелем и желатином. Для полного обеспложивания применяют дробную стерилизацию (при 100 0 С) 20-30 мин 3 дня подряд. Это убивает и споры.

Стерилизация паром под давлением – наиболее эффективный метод обеспложивания. Перевязочный материал, белье стерилизуют при 1 атм. 15-20 мин, инфицированный материал при 1,5-2 атм в течение 20-25 мин.

Дан­ный способ стерилизации питательных сред является наиболее надежным и чаще всего применяемым. Он основан на нагревании материала насыщенным водяным паром при давлении выше атмосферного. Известно, что темпера­тура пара возрастает при повышении его давления (табл. 4.1).

Совместное действие высокой тем­пературы и пара обеспечивает особую эффективность этого процесса. При этом погибают и вегетативные клетки, и споры микроорганизмов. Установле­но, что споры большинства микроор­ганизмов не выдерживают и 5-минутную экспозицию в насыщенном паре при 121 °С. Лишь споры некоторых по­чвенных бактерий погибают при 1 ати только через 30 мин.

Таблица 4.1 Температура насыщенного пара при разных давлениях

ати* - избыточное атмосферное давление

Рис. 4.1. Схема автоклава:

1 - стерилизационная камера; 2 - кран для выхода воздуха; 3 - манометр; 4- предохранительный клапан; 5- водопаровая ка­мера; 6 - воронка для заполнения автоклава водой; 7 - водо­мерная трубка; 8 - отверстия для поступления пара в стерили-зационную камеру; 9 - защитный кожух; 10 - крышка автокла­ва; 11 - подставка для размещения стерилизуемых предметов

Стерилизацию паром под давлением осуществляют в специальных гермети­чески закрывающихся толстостенных аппаратах - автоклавах. Автоклавы раз­нообразны по форме, размерам, рабочему давлению, конструкции и другим показателям. Они могут быть с ручным управлением, полуавтоматические и автоматические, но, поскольку все автоклавы предназначены для выполнения одной и той же задачи - стерилизации, основной принцип их устройства один и тот же.

На рис. 4.1 показана схема вертикального автоклава с ручным у правлением. Автоклав представляет собой металлический двустенный резервуар, способный выдержать вы­сокое давление. Его внутренняя часть является стерилизационной камерой (7). В нее помещают стерилизуемый материал. Стерилизационная камера снабжена краном (2) для выхода воздуха, манометром (3) для определения давления пара и предохрани­тельным клапаном (4) для выхода пара при повышении давления сверх необходимого и для предотвращения разрыва автоклава. Пространство между стенками, называемое водопаровой камерой (5), заполняется через воронку (6) водой (лучше дистиллиро­ванной, чтобы не образовывалась накипь) до определенного уровня, который отме­чен на специальной водомерной трубке автоклава (7). Выше этого уровня воду нали­вать не следует, так как при бурном кипении вода может попасть в трубку, ведущую к манометру и исказить его показания. В верхней части внутренней стенки водопаровой камеры имеются отверстия (8), через которые пар поступает в стерилизационную ка­меру. Паровой котел сверху покрыт защитным кожухом (9). Он предохраняет котел от механических повреждений, а работающего около автоклава - от ожогов. Для созда­ния герметичности автоклав плотно закрывают массивной крышкой (10) с резиновой прокладкой. Стерилизуемые предметы помещают на специальную подставку (11).

Процесс автоклавирования.

Отдельные операции процесса стерилизации в автокла­вах разных типов могут быть несколько различными. Соответственно несколько разли­чается и техника работы с ними, однако общий принцип проведения стерилизации в разных автоклавах одинаковый.

Перед работой осматривают автоклав и контрольно-измерительную аппаратуру. При наличии любой неисправности (смещение стрелки манометра с нуля, трещина на во­домерной трубке и др.) работать с прибором нельзя. После осмотра автоклава в водопаровую камеру наливают воду до верхней отметки на водомерной трубке. В стерилиза­ционную камеру на специальную подставку из дерева помещают стерилизуемый мате­риал. Предметы следует размещать не слишком плотно, так как пар должен свободно проходить между ними, иначе они не нагреются до нужной температуры и могут остаться нестерильными. Загрузив стерилизационную камеру, устанавливают и плотно завинчивают крышку (дверь) автоклава. Затем открывают кран, соединяющий стери­лизационную камеру с наружным воздухом, и включают нагрев.

После начала парообразования удаляют воздух из стерилизационной камеры. Это необходимое условие стерилизации, так как при одном и том же давлении температура чистого пара выше температуры смеси пара и воздуха. Если в автоклаве останется воздух, материал может не простерилизоваться. Наиболее простой и очень распространенный способ освобождения автоклава от воздуха - вытеснение воздуха паром. Пар и конденсат отводят либо в сосуд с водой, либо в специальное устройство, соединенное с канализацией. В первом случае на кран (2) надевают резиновый шланг, который опускают в воду. Началом продувания считается появление устойчивой непрерывной струи чистого пара. Пока в автоклаве еще имеется воздух, смесь воздуха и пара, прохо­дя через воду, издает сильный треск. Чистый пар выходит с равномерным шипящим звуком. Его пропускают в течение 10 мин. В целом вся операция с момента появления пара с воздухом должна занимать не более 15 - 20 мин, иначе в автоклаве останется мало воды и он может испортиться. Чтобы уменьшить расход пара (воды), кран откры­вают не полностью. Степень открывания крана устанавливают на практике при эксплу­атации автоклава. В наиболее совершенных автоклавах воздух из стерилизационной ка­меры удаляют с помощью вакуумного насоса.

Когда воздух вытеснен, закрывают пароотводной кран, и давление пара доводят до показания, соответствующего режиму стерилизации. Режим автоклавирования часто выражают в единицах избыточного давления, указывая при этом длительность его под­держания, например стерилизация при 1 ати в течение 20 мин. На манометре автокла­ва обозначается именно то избыточное давление, которое создается в автоклаве сверх нормального. Нередко режим автоклавирования характеризуется температурой и вре­менем. Как только стрелка манометра дойдет до указателя определенного дополнитель­ного давления и, следовательно, температура пара достигнет соответствующего значе­ния, этот уровень давления пара поддерживают в течение необходимого времени пу­тем ручного или автоматического регулирования подачи пара. В автоматических авто­клавах подачу пара регулируют электроконтактным манометром.

По окончании времени стерилизации выключают нагрев автоклава. Давление в ав­токлаве постепенно падает и сравнивается с атмосферным. Лишь после этого открыва­ют кран, выводящий пар. Преждевременное открывание крана недопустимо, так как перегретые среды при резком снижении давления сразу же бурно закипают, смачива­ют и даже иногда выталкивают ватные пробки, что нарушает стерильность материала. Когда пар выйдет, открывают крышку (дверь) автоклава, соблюдая при этом осто­рожность во избежание ожога паром лица и рук. Удаление пара из стерилизационной камеры автоклавов, оснащенных вакуумным насосом, осуществляют с помощью на­соса. Одновременно происходит подсушивание стерильного материала.

Поскольку автоклав работает при высоких давлениях и температурах, неправильное обращение с ним может быть причиной несчастных случаев. Установка автоклава и работа с ним производятся при точном и строгом выполнении правил, указанных в прилагаемой к автоклаву инструкции. К работе допускаются только подготовленные лица, имеющие специальное разрешение.

При необходимости проконтролировать температуру в автоклаве пользуются раз­ными веществами, плавящимися при определенной температуре. Эти вещества пред­варительно смешивают с нейтральными красителями и помещают в автоклав до нача­ла стерилизации. В качестве индикаторов температуры используют фенантрен (темпе­ратура плавления 98-100°С), бензаурин (115°С), серу (119 °С), бензойную кислоту (121 - 122 °С), мочевину (132°С), глюкозу (146°С), тиомочевину (180°С), аскорбино­вую кислоту (187- 192 °С). На 100 г этих веществ берут 0,01 г красителя (фуксин, метиленовый синий), тщательно смешивают, рассыпают в стеклянные трубочки с одинако­вым диаметром и толщиной стенок, запаивают и в вертикальном положении расклады­вают между стерилизуемым материалом в автоклаве. По достижении в сосуде соответ­ствующей температуры эти вещества расплавляются и окрашиваются в цвет добавлен­ного в них красителя.

Подготовка сред к стерилизации.

При автоклавировании 3 - 5 % жидкости теряется в ре­зультате испарения, поэтому рекомендуется в приготавливаемые среды добавлять сверх объе­ма примерно 5 % дистиллированной воды. Тог­да после стерилизации среда (раствор) будет иметь требуемую концентрацию.

Среды обычно стерилизуют в пробирках, колбах, бутылях. Емкости заполняют средой не более чем на половину их высоты, чтобы пре­дотвратить смачивание пробок. Сосуды со сре­дами закрывают ватными пробками. Они предо­храняют среду от заражения микроорганизма­ми, находящимися в окружающем воздухе.

Пробки должны быть достаточно плотными, чтобы выполнять эту функцию, но с достаточно равномерным распределением волокон ваты, так как через них происходит газообмен культур с окружающей средой. Слишком плотные пробки затрудняют снабжение культур воздухом.

Для приготовления пробки плоский кусок ваты, взятый вдоль волокна, скаты­вают валиком. Чтобы придать пробке прочность, ее прокатывают между ладо­нью и чистым стеклом, лежащим на столе. Длина пробки для обычной пробир­ки примерно 4 см. Пробка должна входить в пробирку на 1,5 - 2,0 см (рис. 4.2). Для сохранения формы пробку вынимают из горлышка, слегка вращая. Удобно обернуть пробку чистой марлевой салфеткой.

Перед стерилизацией пробки можно прикрыть бумажными колпачками. Нельзя обертывать пробки сосудов, которые будут стерилизоваться в автокла­ве, целлофаном, фольгой или другими материалами, не пропускающими пар, так как пар должен проникать через пробку в сосуд, иначе среды не нагреются до нужной температуры и не простерилизуются. При использовании стеклян­ных, резиновых, корковых и других пробок их завертывают в двойной слой оберточной бумаги и стерилизуют привязанными к склянке, закрытой ватной пробкой. Пробки в сосуде меняют стерильно около пламени горелки.